Обеспечение безопасности при работе с рекомбинантными молекулами ДНК - OXFORDST.RU

Обеспечение безопасности при работе с рекомбинантными молекулами ДНК

Этические проблемы при работе с рекомбинантной ДНК и при создании трансгенных организмов. — презентация

Презентация была опубликована 3 года назад пользователемАрина моловская

Похожие презентации

Презентация на тему: » Этические проблемы при работе с рекомбинантной ДНК и при создании трансгенных организмов.» — Транскрипт:

1 Этические проблемы при работе с рекомбинантной ДНК и при создании трансгенных организмов

2 Введение Этические вопросы Рекомбинантной ДНК -это современная технология, предполагающая сочетание ДНК из одного организма с ДНК другого. Это часто включает в себя вставку ДНК человека в ДНК другого организма. Когда эти генетически модифицированные организмы культивируются, они производят белок человека. Рекомбинантная ДНК дает ученым гораздо больший контроль над генетическими манипуляциями, например, рекомбинантные методы ДНК в настоящее время используются для создания бактериальных штаммов, которые производят инсулин человека в больших количествах, и этот инсулин был использован клинически без каких-либо сообщенных побочных эффектов. Другими успехами этого метода являются человеческий интерферон (белок, важный для системы защиты организма) и гормоны роста человека. Рекомбинантная ДНК была скачком, который способствует генетически инженерных микроорганизмов, модифицированных растений и животных, клонирования, генной терапии человека (исправление генетического расстройства) и картирования хромосом человека.

3 Рекомбинантные (Химерные ) ДНК:

4 Создаваемые генными инженерами рекомбинантные ДНК называют химерными. Они были созданы для самых разнообразных целей, в том числе и для целенаправленного воздействия на ВИЧ. В последние годы число научных работ в этом направлении очень велико. Одна из испытанных схем с использованием химерных ДНК заключалась в следующем. К гену, кодирующему белок-рецептор CD4, «подшили» другой ген, который обеспечивает синтез растительного белка рицина. Рицин еще в средние века использовался в качестве сильнейшего яда. Попадая в клетку, он блокирует синтез белка в цитоплазме, тем самым убивая ее. После внесения в клетки такой рекомбинантной ДНК в конечном итоге происходит образование кодируемого ей химерного белка. Та его часть, которая соответствует белку-рецептору, обеспечивает строго специфическое связывание химеры с клетками, на поверхности которых содержится вирусный белок CD4. Другая же представляет собой яд рицин и уничтожает клетки, с которыми связывается химерная молекула. Таким образом, одна часть химеры обеспечивает направленный поиск в организме клеток, зараженных вирусом, а другая ее часть убивает их. Другой подход к борьбе с ВИЧ-инфекцией основан на способности некоторых вирусных белков ( Tat и Rev ), чрезвычайно важных для размножения ВИЧ в клетках, специфически связываться с определенными участками молекулы вирусной РНК. Для того, чтобы предотвратить этот жизненно важный процесс, было предложено вводить в инфицированные клетки искусственно синтезированные РНК, содержащие участки связывания с вирусными белками. Вирусному белку все равно, с чем связываться — с вирусной РНК или точно такой же «копией», сконструированной искусственно. Добавленная в клетку в большом количестве, «копия» играет в данном случае роль «ловушки»: если ее много, белок вируса будет связываться преимущественно с ней, а не с РНК вируса, и, в результате этого, ВИЧ перестанет размножаться.

5 Этические проблемы Новые технологии ставят перед человечеством новые этические вопросы, требующие ответа. Пожалуй, наиболее активные дискуссии порождает генетика. Как правило, эти дискуссии идут между двумя позициями: Первая – это изменения норм этики и законодательства вслед за техническим прогрессом. Вторая – поддержание статуса кво в этих областях.

6 В апреле 2015 года в Китае (группа ученых университета Сунь Ятсена) впервые в мире был проведен эксперимент по редактированию человеческого генома с помощь технологии CRISPR/Cas9. Точнее, человеческих эмбрионов. Эксперимент шел на 54 оплодотворенных яйцеклетках. В 28 из них получилось внести нужные разрывы в геном, но только в четырех случаях репарация разрыва завершилась заменой последовательности гена на нужную. Но также были обнаружены разрывы там, где их не должно было быть. Авторы не ожидали настолько высокого уровня ошибок. Пока остается не ясным, с чем связаны ошибки – с условиями эксперимента или с особенностями человеческих эмбрионов. Для выяснения этого нужно, чтобы эксперимент был повторен другими группами.

7 И вот, спустя 8 месяцев, Великобритания разрешила редактировать геном человеческих эмбрионов. Она выдало первое разрешение на редактирование генома эмбрионов человека в исследовательских целях. Его получит исследовательская группа из Института Френсиса Крика под руководством биолога Кети Никен (Kathy Niakan). Великобритания, таким образом, станет второй страной в мире, где разрешены подобные процедуры. Так же, как и в Китае, в английском планируемом эксперименте будут использоваться «лишние» эмбрионы: которые получают, но не используют в ходе процедуры экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). Сейчас такие эмбрионы просто уничтожают.

8 Этические аспекты при создание трансгенных организмов Первые трансгенные животные были получены более 20 лет назад, однако до сих пор они не используются в хозяйственной деятельности. Причин этому много: этические, технические, финансовые и т.д. Основным направлением генетической инженерии животных является выведение пород с повышенной продуктивностью, устойчивостью к болезням, из которых получают продукцию с лучшими качественными характеристиками. Существуют отдельные проекты, основной целью которых является улучшение потребительских свойств продуктов, вырабатываемых животными или из животных, а также научные разработки, исследующие модификации отдельных генов для изменения физико-химических свойств.

9 Один из первых успешных экспериментов по созданию трансгенных животных было осуществлено на мышах. В геном мыши встроили ген, кодирующий гормон роста крысы. Такие трансгенные мыши росли в 2 З раза быстрее, чем их родственники, не было чужого гена, и достигали примерно вдвое больших размеров (рис. 2.19). Для создания трансгенных животных используют различные методы ввода ДНК: с помощью вирусов; микроинъекции в яйцеклетки, стволовые клетки; фагоцитоз и др. Все более популярным становится процесс, контролируемым по сравнению с другими. Несколько клеток раннего зародыша размножают в питательной среде. ДНК вводят в эти клетки различными способами, в т. Ч. С помощью микроинъекции. Преимущество метода заключается в том, что трансформированные клетки можно определить до того, как они будут введены в материнские организмы как яйцеклетки. Таким образом обеспечивают рождения трансгенного организма.

10 Трансгенные биотехнологии представляют собой захватывающий спектр возможностей, от кормления голодных до профилактики и лечения заболеваний; однако эти обещания не лишены потенциальной опасности. Некоторые из вопросов, которые необходимо рассмотреть, являются следующими: Этично ли создавать измененных животных, которые могут пострадать? Необходимо также обсудить риски и преимущества экспериментального использования животных. Аналогичным образом, сочетая ДНК животных и ДНК человека с ДНК растений, мы рискуем создать новые заболевания, для которых нет лечения? Долгосрочные риски для окружающей среды неизвестны. Различные биоэтики, экологи и правозащитники утверждают, что создавать «монстров»неправильно. или животных, которые пострадали бы в результате генетической череды (например, свинья без ног), и что такие эксперименты должны быть запрещены.

11 Трансгенные позиции Преимущества использования трансгенных животных можно разделить на три большие категории: медицинские, научные и льготное питание. Медицинские преимущества видны при заболевании модели, как мышь Альцгеймера, которые учат нас, как инициировать процесс болезни. Такие модели необходимы для выполнения экспериментов, не имеющие этического характера в людях.

12 Вывод Есть много проблем, связанных с получением трансгенных животных, некоторые реальные. Обычно применяется в практике генетической модификации — это фраза «Играя Бога», что может означать, что человек стал высокомерным и игнорировал его уважение для природы, или иначе каким-то образом нарушил природу. Уничтожение «целостности» генома животных, в этом случае применяется к неповрежденности генома, вызывает беспокойство у экологов. Возникает вопрос интереса, кто на самом деле приносят пользу: люди или биотехнологические инвесторы? Тогда есть скользкий аргумент склона в котором говорится, что то, что можно сделать с животными, может когда-нибудь быть сделано с людьми. Наиболее широко распространенные аргументы против объекта технологии в отношении страданий животных и к сохранению благосостояния трансгенных животных. Также потеря генетического разнообразия, экологические риски и риски для здоровья человека.

Обеспечение безопасности при работе с рекомбинантными молекулами ДНК (стр. 1 из 2)

РЕФЕРАТ ПО ДИСЦИПЛИНЕ

ОБЕСПЕЧЕНИЕ БЕЗОПАСНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С РЕКОМБИНАНТНЫМИ МОЛЕКУЛАМИ ДНК

Студент IV курса

Студенты кафедры биохимии для исследовательской работы направляются в различные научно-исследовательские институты, а также могут заниматься в лабораториях кафедры. Моя работа проходит в лаборатории «Регуляция экспрессии генов» Института Цитологии РАН. Непосредственно моя научная деятельность не связана с животными и в основном мне приходится иметь дело с культурами клеток млекопитающих или бактериальных клеток. Большую же часть времени отводится на работу с еще более мелкими объектами — молекулами нуклеиновых кислот и белков. Исследования нашей группы связаны с изучением роли продукта гена ретинобластомы (pRb) в регуляции клеточного цикла. Большинство клеток на том или ином этапе своего развития претерпевают деление, т.е. проходят через фазы клеточного цикла. Впервые белок pRb был описан в связи с мутацией кодирующего его гена в трансформированных (т.е. ставших злокачественными) клетках сетчатки глаза. Именно с отсутствием данного белка связаны опухоли этой ткани (ретинобластомы), а также, как выяснилось впоследствии, и других тканей. Белок pRb экспрессируется у всех эукариотических организмов — от дрожжей до человека и у всех выполняет роль супрессора (негативного регулятора) клеточного цикла. Именно поэтому мы считаем, что изучение закономерностей в клеточном цикле, рассмотрение механизмов его регуляции и представляет собой очень важную и интересную область клеточной биологии.

Читайте также  Любовь. Происхождение брака

В своей научной работе мы используем самые разные инструменты и методы исследования — от световой микроскопии до радиоактивных изотопов. Находят применение также различные электрические приборы и вычислительные машины — от калькулятора до компьютеров. Непосредственно моя работа связана, как правило, с получением рекомбинантных молекул ДНК и последующим использования их в разнообразных целях.

Необходимо отметить, что администрацией Института Цитологии предусмотрены правила безопасной работы с рекомбинантными молекулам ДНК. Эти правила включают меры безопасности и физические меры защиты.

Меры безопасности слагаются из приемов стандартной микробиологической практики, физической и биологической защиты. В соответствии с правилами к работе с рекомбинантными ДНК допускаются лица, прошедшие медицинский осмотр и получившие подготовку, которая предусматривает знание основ биологии организмов, с которыми предстоит работать, и приемов работы с ними. Подготовка должна быть подтверждена документально.

Физические меры защиты разделяются на несколько уровней.

Минимальный уровень (Ф1)

Эксперименты, требующие физической защиты первого уровня, могут проводится в лаборатории, предназначенной для работы с микроорганизмами ряда Escherichia (штамм E. Coli K-12) с помощью известных и общепринятых микробиологических методов. Работа проводится на открытых поверхностях без специального защитного оборудования. В лаборатории должна поддерживаться строгая чистота. Прием и хранение пищи, курение в этом помещении запрещены. Следует использовать для работы только механические пипетки. В лаборатории Ф1 проводят все эксперименты по клонированию фрагментов ДНК прокариотического и эукариотического направления.

Низкий уровень (Ф2)

Эксперименты, в которых необходима физическая защита вторго уровня, могут проводится в помещениях, подобных лаборатории Ф1, однако доступ посторонних лиц в лабораторию ограничивается. Автоклав (паровой стерилизатор) устанавливается в том же здании, где расположена лаборатория. Рекомендуется использование боксов с ламинарным потоком воздуха и другие устройства физической защиты, сводящие к минимуму опасность утечки материалов. Использованные в опыте материалы, содержащие микроорганизмы, обеззараживаются. Во время работы на двери лаборатории вывешивается знак биологической опасности. Применяются все приемы, обязательные для Ф1. В лаборатории Ф2 проводятся эксперименты по манипуляции с генами животных и человека, могущих нести потенциальную биологическую опасность (в том числе с онкогенами на основе клеток E. Coli K-12 и векторов типа pBR322, pUC и др.).

Средний уровень (Ф3)

Эксперименты, требующие физической защиты третьего уровня, проводятся в лаборатории, имеющей специальные инженерные конструкции и защитное оборудование, а также автономное оборудование: автоклав, СО2 инкубатор, центрифуги, термостаты. Лаборатория отделяется от других помещений дверями с блокировкой, обеспечивающими герметичность. Поверхности стен, полов, столов и потолков должны тщательно очищаться и деконтаминироваться. Внутри лаборатории создается отрицательное давление. Воздух из лаборатории поступает за ее пределы по самостоятельным воздуховодам после предварительной очистки на фильтрах. Работы, проводимые в лаборатории Ф3 включают эксперименты на клетках животных и человека, трансформированных онкогенами и ретровирусами, содержащими различные гены, в том числе онкогены. На дверях лаборатории, оборудовании и материалах устанавливается знак биологической опасности.

Вход в лабораторию Ф3 разрешается только тем лицам, чье присутствие предусмотрено программой исследований и утверждено комиссией института по рекомбинантным ДНК.

Работающие должны пользоваться средствами индивидуальной защиты в соответствии с нормами их бесплатной выдачи.

Непосредственно после работы рабочие поверхности боксов и другого оборудования обеззараживаются, стеклянная посуда стерилизуется непосредственно в лаборатории.

Высокий уровень Ф4 — в Институте Цитологии РАН не предусматривается.

УСЛОВИЯ ТРУДА ВО ВРЕМЯ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Для выполнения научной работы я пользуюсь следующим оборудованием:

— термостат (температура до 85С)

— настольная микроцентрифуга (максимальная скорость — 12000 об/мин)

— центрифуги К-23 и К-24 (максимальная скорость — 15000 об/мин)

— камеры для проведения гель-электрофореза

— аппарат для блоттинга

Регистрация результатов проводится с помощью траниллюминатора, обычных ламп накаливания и фотоаппарата. В связи с этим, определенная часть рабочего времени проходит в фотокомнатах.

Трансиллюминатор представляет собой прибор, состоящей из ламп, испускающих ультрафиолетовый свет и кварцевого стекла (такое стекло используется, поскольку оно пропускает ультрафиолетовые лучи). Так как излучение в ультрафиолетовом диапазоне является небезопасным для глаза, то наблюдение ведется только в специальных очках, приспособленных для этих целей. Ультрафиолетовый свет применяется с целью детекции фрагментов ДНК, разделенных в агарозном геле и связанных со специальным красителем — бромистым этидием, который поглощает свет в указанном диапазоне. Благодаря этому становится возможным наблюдение фрагментов ДНК и определение их размеров, а также получение их в препаративных количествах для последующего использования.

Камеры для электрофореза представляют собой емкости определенной конфигурации, в которые помещается гель, а затем заливается буфер, содержащий заряженные подвижные частицы — ионы. Благодаря такой конструкции обеспечивается подвижность фрагментов нуклеиновых кислот или белков в гелях и их разделение из смеси. Разделение проводится при силе тока до 50 мА и напряжении до 100 V.

Устройство для переноса (блоттинга) состоит из двух платиновых пластин, помещенных в изолирующую камеру. Параметры электрического тока при переносе не превосходят указанных для гель-электрофореза.

Используется термостаты двух типов — воздушный и водяной. Температура в воздушном термостате не превышает 37С, а в водяном — 85С.

Работы проводятся на лабораторном столе. Применяется искусственное освещение рабочей зоны бытовыми лампами накаливания мощностью 100 W. При обработке полученных в ходе исследований данных используется персональный компьютер.

Следует отметить, что поскольку различное оборудование, использующееся в работе, в силу своих естественных габаритов и функционального назначения располагается на различных этажах здания института. Поэтому весьма часто рабочая зона принимает довольно внушительные размеры (с 1-го по 3-ий этаж). Особенно большие неудобства это причиняет, когда в целях экономии электроэнергии, лифты обесточивают, начиная с 16 часов, что позволяет отнести работу в это время к категории IIб. В остальное время работа относится, по всей видимости, к категории легких.

В своей работе мы используем разнообразные приборы, которые питаются от электросети. Гель-электрофорез проводится при силе тока до 50 мА и напряжении до 100 V. Все контакты при этом надежно изолированы. Проводящие ток поверхности присутствуют только в аппарате для переноса (блоттинга), однако они заключены в изолирующую камеру, исключающую контакт с ней во время блоттинга.

ИОНИЗИРУЮЩИЕ И ЭЛЕКТРОМАГНИТНЫЕ ИЗЛУЧЕНИЯ

Источником таких излучений является монитор персонального компьютера. В принципе он излучает электромагнитные волны сверхнизкой частоты, мягкое рентгеновское излучение. Однако монитор, в настоящее время использующийся в нашей лаборатории обладает низкой интенсивностью излучения и соответствует международному стандарту (LR — «Low Radiation»). Кроме того, время непрерывной работы с компьютером не превышает, как правило, одного часа.

При работе с компьютером для повышения контраста изображения и устранения бликов экрана используется экранный фильтр. Кроме того, монитор поддерживает режим построчной развертки «NI» и стабилизации изображения для снижения утомляемости глаз во время работы.

Реферат: Обеспечение безопасности при работе с рекомбинантными молекулами ДНК

РЕФЕРАТ ПО ДИСЦИПЛИНЕ

ОБЕСПЕЧЕНИЕ БЕЗОПАСНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С РЕКОМБИНАНТНЫМИ МОЛЕКУЛАМИ ДНК

Студент IV курса

Студенты кафедры биохимии для исследовательской работы направляются в различные научно-исследовательские институты, а также могут заниматься в лабораториях кафедры. Моя работа проходит в лаборатории «Регуляция экспрессии генов» Института Цитологии РАН. Непосредственно моя научная деятельность не связана с животными и в основном мне приходится иметь дело с культурами клеток млекопитающих или бактериальных клеток. Большую же часть времени отводится на работу с еще более мелкими объектами — молекулами нуклеиновых кислот и белков. Исследования нашей группы связаны с изучением роли продукта гена ретинобластомы (pRb) в регуляции клеточного цикла. Большинство клеток на том или ином этапе своего развития претерпевают деление, т.е. проходят через фазы клеточного цикла. Впервые белок pRb был описан в связи с мутацией кодирующего его гена в трансформированных (т.е. ставших злокачественными) клетках сетчатки глаза. Именно с отсутствием данного белка связаны опухоли этой ткани (ретинобластомы), а также, как выяснилось впоследствии, и других тканей. Белок pRb экспрессируется у всех эукариотических организмов — от дрожжей до человека и у всех выполняет роль супрессора (негативного регулятора) клеточного цикла. Именно поэтому мы считаем, что изучение закономерностей в клеточном цикле, рассмотрение механизмов его регуляции и представляет собой очень важную и интересную область клеточной биологии.

В своей научной работе мы используем самые разные инструменты и методы исследования — от световой микроскопии до радиоактивных изотопов. Находят применение также различные электрические приборы и вычислительные машины — от калькулятора до компьютеров. Непосредственно моя работа связана, как правило, с получением рекомбинантных молекул ДНК и последующим использования их в разнообразных целях.

Необходимо отметить, что администрацией Института Цитологии предусмотрены правила безопасной работы с рекомбинантными молекулам ДНК. Эти правила включают меры безопасности и физические меры защиты.

Читайте также  Налоговое консультирование как особый вид консалтинга

Меры безопасности слагаются из приемов стандартной микробиологической практики, физической и биологической защиты. В соответствии с правилами к работе с рекомбинантными ДНК допускаются лица, прошедшие медицинский осмотр и получившие подготовку, которая предусматривает знание основ биологии организмов, с которыми предстоит работать, и приемов работы с ними. Подготовка должна быть подтверждена документально.

Физические меры защиты разделяются на несколько уровней.

Минимальный уровень (Ф1)

Эксперименты, требующие физической защиты первого уровня, могут проводится в лаборатории, предназначенной для работы с микроорганизмами ряда Escherichia (штамм E. Coli K-12) с помощью известных и общепринятых микробиологических методов. Работа проводится на открытых поверхностях без специального защитного оборудования. В лаборатории должна поддерживаться строгая чистота. Прием и хранение пищи, курение в этом помещении запрещены. Следует использовать для работы только механические пипетки. В лаборатории Ф1 проводят все эксперименты по клонированию фрагментов ДНК прокариотического и эукариотического направления.

Низкий уровень (Ф2)

Эксперименты, в которых необходима физическая защита вторго уровня, могут проводится в помещениях, подобных лаборатории Ф1, однако доступ посторонних лиц в лабораторию ограничивается. Автоклав (паровой стерилизатор) устанавливается в том же здании, где расположена лаборатория. Рекомендуется использование боксов с ламинарным потоком воздуха и другие устройства физической защиты, сводящие к минимуму опасность утечки материалов. Использованные в опыте материалы, содержащие микроорганизмы, обеззараживаются. Во время работы на двери лаборатории вывешивается знак биологической опасности. Применяются все приемы, обязательные для Ф1. В лаборатории Ф2 проводятся эксперименты по манипуляции с генами животных и человека, могущих нести потенциальную биологическую опасность (в том числе с онкогенами на основе клеток E. Coli K-12 и векторов типа pBR322, pUC и др.).

Средний уровень (Ф3)

Эксперименты, требующие физической защиты третьего уровня, проводятся в лаборатории, имеющей специальные инженерные конструкции и защитное оборудование, а также автономное оборудование: автоклав, СО2 инкубатор, центрифуги, термостаты. Лаборатория отделяется от других помещений дверями с блокировкой, обеспечивающими герметичность. Поверхности стен, полов, столов и потолков должны тщательно очищаться и деконтаминироваться. Внутри лаборатории создается отрицательное давление. Воздух из лаборатории поступает за ее пределы по самостоятельным воздуховодам после предварительной очистки на фильтрах. Работы, проводимые в лаборатории Ф3 включают эксперименты на клетках животных и человека, трансформированных онкогенами и ретровирусами, содержащими различные гены, в том числе онкогены. На дверях лаборатории, оборудовании и материалах устанавливается знак биологической опасности.

Вход в лабораторию Ф3 разрешается только тем лицам, чье присутствие предусмотрено программой исследований и утверждено комиссией института по рекомбинантным ДНК.

Работающие должны пользоваться средствами индивидуальной защиты в соответствии с нормами их бесплатной выдачи.

Непосредственно после работы рабочие поверхности боксов и другого оборудования обеззараживаются, стеклянная посуда стерилизуется непосредственно в лаборатории.

Высокий уровень Ф4 — в Институте Цитологии РАН не предусматривается.

УСЛОВИЯ ТРУДА ВО ВРЕМЯ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Для выполнения научной работы я пользуюсь следующим оборудованием:

— термостат (температура до 85С)

— настольная микроцентрифуга (максимальная скорость — 12000 об/мин)

Обеспечение безопасности при работе с рекомбинантными молекулами ДНК

от 11 августа 1993 г. N 8

Дата введения: 1 сентября 1993 г.

САНИТАРНЫЕ ПРАВИЛА ПО БЕЗОПАСНОСТИ

РАБОТ С МИКРООРГАНИЗМАМИ

ПОРЯДОК ВЫДАЧИ РАЗРЕШЕНИЯ НА РАБОТУ

С МИКРООРГАНИЗМАМИ I-IV ГРУПП ПАТОГЕННОСТИ

И РЕКОМБИНАНТНЫМИ МОЛЕКУЛАМИ ДНК

Документ разработан Противочумным центром Госкомсанэпиднадзора России (Головченко Н.Н., Королев Ю.С., Кюрегян А.А., Пономарева Т.Н.).

Настоящие санитарные правила разработаны и утверждены на основании Закона Российской Федерации «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения» от 19 апреля 1991 г.

Государственный санитарно-эпидемиологический надзор за соблюдением санитарных правил государственными органами, предприятиями, учреждениями и организациями, должностными лицами и гражданами возлагается на органы и учреждения Государственной санитарно-эпидемиологической службы Российской Федерации.

Санитарные правила распространяются на все учреждения на территории Российской Федерации независимо от их подчиненности и форм собственности, должностных лиц и граждан, проводящих работы с микроорганизмами I-IV групп патогенности и рекомбинантными молекулами ДНК.

Настоящие санитарные правила устанавливают единый на территории России порядок выдачи разрешения на работу с микроорганизмами I-IV групп патогенности и рекомбинантными молекулами ДНК.

Настоящие санитарные правила устанавливают единый на территории России порядок выдачи разрешения на работу с микроорганизмами I-IV групп патогенности при проведении экспериментальных и диагностических исследований, производстве иммунобиологических препаратов и продуктов микробиологического синтеза. Данный порядок распространяется на все государственные, кооперативные и иные учреждения (предприятия) независимо от их ведомственной принадлежности и форм собственности.

Экспериментальные, диагностические, производственные и другие работы с возбудителями I-IV групп патогенности могут выполняться только при наличии в учреждении (предприятии) разрешения на право работы с ними, выданного органом или учреждением Государственной санитарно-эпидемиологической службы России.

Разрешение выдается на каждый вид микроорганизма, используемого в работе, и является официальным подтверждением того, что в данном учреждении (предприятии) созданы необходимые санитарно-гигиенические условия, обеспечивающие соблюдение требований биологической безопасности, защиту населения и охрану окружающей среды.

Устанавливается следующий порядок выдачи разрешений.

1. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации выдает разрешение учреждениям на проведение работ независимо от ведомственной принадлежности:

с микроорганизмами I группы патогенности — противочумным и другим специализированным учреждениям;

с микроорганизмами II группы патогенности — экспериментальные исследования;

с микроорганизмами II группы патогенности — диагностические (полевые) исследования в лабораториях центров Госсанэпиднадзора;

с рекомбинантными молекулами ДНК — согласно санитарно-противоэпидемическим правилам «Безопасность работы с рекомбинантными молекулами ДНК», утвержденным Главным государственным санитарным врачом СССР 18 января 1989 г., N 5-6/2 и Федерального закона «О государственном регулировании в области генно-инженерной деятельности» от 5 июля 1996 года N 86-ФЗ.

2. Главные государственные санитарные врачи по субъектам Российской Федерации выдают разрешения всем учреждениям, расположенным на обслуживаемой административной территории на проведение:

диагностических исследований с микроорганизмами II группы патогенности, за исключением противочумных станций, лабораторий отделов особо опасных инфекций и вирусологических лабораторий центров Госсанэпиднадзора;

всех видов работ с микроорганизмами III-IV групп патогенности.

3. Главные государственные санитарные врачи по субъектам Российской Федерации могут делегировать права выдачи разрешений на работу с микроорганизмами III-IV групп патогенности Главным государственным санитарным врачам по районам и городам.

4. Противочумные станции выдают разрешения на право проведения диагностических работ с микроорганизмами I-II групп патогенности лабораториям эпидемиологических отрядов.

5. Учреждения (предприятия), работающие с патогенными микроорганизмами, создают комиссии по контролю за соблюдением требований биологической безопасности.

6. Разрешение на работу с микроорганизмами I-II групп патогенности выдается на основании:

ходатайства руководителя вышестоящей организации. Для противочумных станций — директора курирующего научно-исследовательского противочумного института. Учреждения, непосредственно подчиненные Минздраву России, ограничиваются представлением руководителя;

пояснительной записки, в которой указывается технология проведения работ, выполняемые операции, объемы биомассы (для экспериментальных и производственных работ), аппаратурное оформление помещений, схема движения патогенных микроорганизмов, персонала, отходов, наличие и оценка эффективности работы инженерно-технических систем обеспечения техники безопасности и защиты окружающей среды (система обработки стоков, фильтров вентиляционных систем, передаточных устройств, автоклавов и санпропускников); данные о подготовке персонала, сроках его вакцинации; порядок использования средств индивидуальной защиты;

графического материала (копия поэтажного плана схемы планировок подразделений с указанием назначения помещений, размещения оборудования, разводки вентиляционных систем, отопления, канализации и водоснабжения);

акта комиссии данного учреждения по контролю за соблюдением требований биологической безопасности;

заключения органов Госсанэпиднадзора или санитарно-эпидемиологической службы министерства обороны, внутренних дел, безопасности, путей сообщения и федерального управления медико-биологических и экстремальных проблем при Минздраве России, осуществляющих санитарно-эпидемиологический надзор в данном учреждении (предприятии), о наличии санитарно-гигиенических условий для проведения данного вида работ. Научно-исследовательским противочумным институтам заключение выдает Противочумный центр Минздрава России, а противочумным станциям — курирующий научно-исследовательский противочумный институт;

разрешение на диагностическую работу с микроорганизмами I-II групп патогенности в лабораториях эпидемиологических отрядов противочумных станций выдается на основании акта обследования комиссии противочумной станции по контролю за соблюдением требований биологической безопасности.

7. Для получения разрешения на выполнение работ с рекомбинантными молекулами ДНК кроме вышеперечисленных документов представляется заключение Межведомственной комиссии по рекомбинантным ДНК Российской академии наук, а для работы с аэрозолями — акт проверки аэродинамической установки на готовность работы с аэрозолями микроорганизмов.

8. Разрешение на работу с микроорганизмами III-IV групп патогенности выдается на основании:

ходатайства руководителя вышестоящей организации на проведение экспериментальных работ или запроса руководителя учреждения на проведение диагностических исследований;

акта комиссии по контролю за соблюдением требований биологической безопасности данного учреждения с приложением схем движения патогенных микроорганизмов;

заключения территориальных органов Госсанэпиднадзора о наличии санитарно-гигиенических условий для проведения данного вида работ.

9. Разрешение (по формам — прил. 1, 2) на работу с микроорганизмами I-IV групп патогенности и рекомбинантными молекулами ДНК выдается сроком на 5 лет, а на право работы с аэрозолями микроорганизмов I-IV групп патогенности — на 2 года.

10. Разрешение может быть аннулировано при нарушении требований биологической безопасности и считается недействительным при несанкционированном изменении планировки и назначения помещений.

11. Документы для получения разрешения Главного государственного санитарного врача Российской Федерации на право работы с микроорганизмами I группы патогенности; II группы патогенности (экспериментальные и диагностические работы в противочумных станциях, лабораториях особо опасных инфекций и вирусологических лабораториях центров Госсанэпиднадзора) и рекомбинантными молекулами ДНК направляются в Противочумный центр Минздрава России.

Читайте также  Взаимосвязь социологии и социальной работы

Противочумный центр проводит экспертную оценку представленных материалов, готовит заключение о возможности выдачи разрешения и несет ответственность за качество его подготовки. При необходимости может привлекать к работе специалистов научно-исследовательских и других учреждений, а также проводить обследование объекта на месте.

Забезпечення безпеки при роботі з рекомбінантними молекулами ДНК

ХАРАКТЕРИСТИКА РОБОТИ
Студенти кафедри біохімії для дослідницької роботи направляються в різні науково-дослідні інститути, а також можуть займатися в лабораторіях кафедри. Моя робота проходить в лабораторії «Регуляція експресії генів» Інституту цитології РАН. Безпосередньо моя наукова діяльність не пов’язана з тваринами і в основному мені доводиться мати справу з культурами клітин ссавців або бактеріальних клітин. Більшу ж частину часу відводиться на роботу з ще більш дрібними об’єктами — молекулами нуклеїнових кислот і білків. Дослідження нашої групи пов’язані з вивченням ролі продукту гена ретинобластоми (pRb) в регуляції клітинного циклу. Більшість клітин на тому чи іншому етапі свого розвитку зазнають поділ, тобто проходять через фази клітинного циклу. Вперше білок pRb був описаний у зв’язку з мутацією кодує його гена в трансформованих (тобто які стали злоякісними) клітинах сітківки ока. Саме з відсутністю даного білка пов’язані пухлини цієї тканини (ретинобластоми), а також, як з’ясувалося згодом, та інших тканин. Білок pRb експресується у всіх еукаріотичних організмів — від дріжджів до людини і у всіх виконує роль супрессора (негативного регулятора) клітинного циклу. Саме тому ми вважаємо, що вивчення закономірностей в клітинному циклі, розгляд механізмів його регуляції і являє собою дуже важливу і цікаву область клітинної біології.
У своїй науковій роботі ми використовуємо найрізноманітніші інструменти і методи дослідження — від світлової мікроскопії до радіоактивних ізотопів. Знаходять застосування також різні електричні прилади й обчислювальні машини — від калькулятора до комп’ютерів. Безпосередньо моя робота пов’язана, як правило, з отриманням рекомбінантних молекул ДНК і подальшим використання їх в різноманітних цілях.
Необхідно відзначити, що адміністрацією Інституту цитології передбачені правила безпечної роботи з рекомбінантними молекулам ДНК. Ці правила включають заходи безпеки і фізичні заходи захисту.
Заходи безпеки складаються з прийомів стандартної мікробіологічної практики, фізичної та біологічного захисту. Відповідно до правил до роботи з рекомбінантними ДНК допускаються особи, які пройшли медичний огляд і отримали підготовку, яка передбачає знання основ біології організмів, з якими належить працювати, і прийомів роботи з ними. Підготовка повинна бути підтверджена документально.
Фізичні заходи захисту поділяються на кілька рівнів.
Мінімальний рівень (Ф1)
Експерименти, потребують фізичного захисту першого рівня, можуть проводиться в лабораторії, призначеної для роботи з мікроорганізмами низки Escherichia (штам E. Coli K-12) за допомогою відомих і загальноприйнятих мікробіологічних методів. Робота проводиться на відкритих поверхнях без спеціального захисного обладнання. У лабораторії повинна підтримуватися сувора чистота. Прийом і зберігання їжі, куріння в цьому приміщенні заборонені. Слід використовувати для роботи тільки механічні піпетки. У лабораторії Ф1 проводять всі експерименти з клонування фрагментів ДНК прокариотического і еукаріотичного напрямки.
Низький рівень (Ф2)
Експерименти, в яких необхідна фізичний захист вторгся рівня, можуть проводиться в приміщеннях, подібних лабораторії Ф1, проте доступ сторонніх осіб в лабораторію обмежується. Автоклав (паровий стерилізатор) встановлюється в тій же будівлі, де розташована лабораторія. Рекомендується використання боксів з ламінарним потоком повітря та інші пристрої фізичного захисту, що зводять до мінімуму небезпеку витоку матеріалів. Використані в досвіді матеріали, що містять мікроорганізми, знезаражуються. Під час роботи на двері лабораторії вивішується знак біологічної небезпеки. Застосовуються всі прийоми, обов’язкові для Ф1. У лабораторії Ф2 проводяться експерименти по маніпуляції з генами тварин і людини, що можуть нести потенційну біологічну небезпеку (у тому числі з онкогенами на основі клітин E. Coli K-12 і векторів типу pBR322, pUC і ін.).
Середній рівень (Ф3)
Експерименти, потребують фізичного захисту третього рівня, проводяться в лабораторії, що має спеціальні інженерні конструкції і захисне обладнання, а також автономне обладнання: автоклав, СО2 інкубатор, центрифуги, термостати. Лабораторія відділяється від інших приміщень дверима з блокуванням, що забезпечують герметичність. Поверхні стін, підлог, столів і стель повинні ретельно очищатися і деконтамініроваться. Усередині лабораторії створюється негативний тиск. Повітря з лабораторії надходить за її межі по самостійним воздуховодам після попереднього очищення на фільтрах. Роботи, що проводяться в лабораторії Ф3 включають експерименти на клітинах тварин і людини, трансформованих онкогенами і ретровирусами, що містять різні гени, в тому числі онкогени. На дверях лабораторії, обладнанні та матеріалах встановлюється знак біологічної небезпеки.
Вхід у лабораторію Ф3 дозволяється тільки тим особам, чия присутність передбачено програмою досліджень і затверджено комісією інституту по рекомбінантним ДНК.
Працюючі повинні користуватися засобами індивідуального захисту відповідно до норм їх безкоштовної видачі.
Безпосередньо після роботи робочі поверхні боксів та іншого обладнання знезаражуються, скляний посуд стерилізується безпосередньо в лабораторії.
Високий рівень Ф4 — в Інституті цитології РАН не передбачено.
УМОВИ ПРАЦІ ПІД ЧАС ЛАБОРАТОРНИХ ДОСЛІДЖЕНЬ

ОБЛАДНАННЯ
Для виконання наукової роботи я користуюся наступним обладнанням:
— термостат (температура до 85С)
— настільна мікроцентрифуга (максимальна швидкість — 12000 об / хв)
— центрифуги К-23 і К-24 (максимальна швидкість — 15000 об / хв)
— камери для проведення гель-електрофорезу
— трансілюмінатор
— апарат для блоттинга
— електрична плитка

Реєстрація результатів проводиться за допомогою траніллюмінатора, звичайних ламп розжарювання і фотоапарата. У зв’язку з цим, певна частина робочого часу проходить в фотокімнаті.
Трансілюмінатор являє собою прилад, що складається з ламп, испускающих ультрафіолетове світло і кварцового скла (таке скло використовується, оскільки воно пропускає ультрафіолетові промені). Так як випромінювання в ультрафіолетовому діапазоні є небезпечним для ока, то спостереження ведеться тільки в спеціальних окулярах, пристосованих для цих цілей. Ультрафіолетове світло застосовується з метою детекції фрагментів ДНК, розділених в агарозному гелі і пов’язаних із спеціальним барвником — бромистим етидієм, який поглинає світло в зазначеному діапазоні. Завдяки цьому стає можливим спостереження фрагментів ДНК і визначення їх розмірів, а також отримання їх в препаративних кількостях для подальшого використання.
Камери для електрофорезу представляють собою ємності певної конфігурації, в які поміщається гель, а потім заливається буфер, що містить заряджені рухомі частинки — іони. Завдяки такій конструкції забезпечується рухливість фрагментів нуклеїнових кислот або білків в гелях та його поділ з суміші. Розділення проводиться при силі струму до 50 мА і напрузі до 100 V.
Пристрій для перенесення (блоттинга) складається з двох платинових пластин, поміщених в ізолюючу камеру. Параметри електричного струму при перенесенні не перевищують зазначених для гель-електрофорезу.
Використовується термостати двох типів — повітряний і водяний. Температура в повітряному термостаті не перевищує 37С, а у водяному — 85С.
Роботи проводяться на лабораторному столі. Застосовується штучне освітлення робочої зони побутовими лампами розжарювання потужністю 100 W. При обробці отриманих в ході досліджень даних використовується персональний комп’ютер.
Слід зазначити, що оскільки різне обладнання, що використовується в роботі, в силу своїх природних габаритів і функціонального призначення розташовується на різних поверхах будинку інституту. Тому вельми часто робоча зона приймає досить значні розміри (з 1-го по 3-ій поверх). Особливо великі незручності це заподіює, коли в цілях економії електроенергії, ліфти знеструмлюють, починаючи з 16 години, що дозволяє віднести роботу в цей час до категорії IIб. В інший час робота відноситься, по всій видимості, до категорії легких.

ШКІДЛИВІ ФАКТОРИ
ЕЛЕКТРИЧНИЙ ТОК
У своїй роботі ми використовуємо різноманітні прилади, які живляться від електромережі. Гель-електрофорез проводиться при силі струму до 50 мА і напрузі до 100 V. Всі контакти при цьому надійно ізольовані. Проводять струм поверхні присутні тільки в апараті для переносу (блоттинга), однак вони укладені в ізолюючу камеру, яка виключає контакт з нею під час блоттинга.

Іонізуючого І ЕЛЕКТРОМАГНІТНІ ВИПРОМІНЮВАННЯ
Джерелом таких випромінювань є монітор персонального комп’ютера. В принципі він випромінює електромагнітні хвилі наднизької частоти, м’яке рентгенівське випромінювання. Однак монітор, в даний час використовується в нашій лабораторії володіє низькою інтенсивністю випромінювання і відповідає міжнародному стандарту (LR — «Low Radiation»). Крім того, час безперервної роботи з комп’ютером не перевищує, як правило, однієї години.

ОСВІТЛЕННЯ
При роботі з комп’ютером для підвищення контрасту зображення і усунення відблисків екрану використовується екранний фільтр. Крім того, монітор підтримує режим порядкової розгортки «NI» і стабілізації зображення для зменшення навантаження на очі під час роботи.
За нормативами СНиП II-4-79 мінімальна освітленість робочої поверхні в даному

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: